动物组织细胞RNA/DNA共提试剂盒 核酸提取
Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免氯仿）适用于从各种动物组织、细胞中同时提取出总RNA、基因组DNA和Protein，提取全程不需要使用氯仿，得到包含总RNA，不需要DNaseI消化，可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、测序等。
动物组织细胞RNA/DNA共提试剂盒 核酸提取
Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit
动物组织/细胞RNA/DNA/Protein共提试剂盒
动物组织细胞RNA/DNA共提试剂盒 核酸提取
目录号：91316
产品内容
产品成份 |
91316-50（50次） |
裂解液MRLPlus |
50ml |
去蛋白液RW1 |
40ml |
漂洗液RW |
10ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-FreeddH2O |
5ml |
70%乙醇 |
9ml（需加入指ding量无水乙醇） |
抑制物去除液IR |
25ml |
漂洗液WB |
13ml（需加入指ding量无水乙醇） |
缓冲液APP |
60ml |
洗脱缓冲液EB |
10ml |
gDNA吸附柱和收集管 |
50套 |
RNA吸附柱和收集管 |
50套 |
RNase-Free1.5ml离心管 |
50支 |
RNase-Free2.0ml液氮研磨管 |
50支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15~25℃）
产品简介
Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免氯仿）适用于从各种动物组织、细胞中同时提取出总RNA、基因组DNA和Protein，提取全程不需要使用氯仿，得到包含总RNA，不需要DNaseI消化，可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、测序等。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。
du特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNase/DNase，然后裂解混合物RNA/DNA/Protein同时通过一个gDNA吸附柱，基因组DNA被吸附而RNA/Protein穿透滤过。gDNA吸附柱上的基因组DNA经过一系列漂洗、洗脱后得到纯净基因组DNA。滤过的总RNA，先用乙醇调节结合条件，然后转入RNA吸附柱，在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上，接着通过一系列快速的离心-漂洗-离心-洗脱，得到纯净的总RNA。滤液经选择性沉淀得到Protein。
注意事项
1.采集RNA样本时，把新鲜组织样本浸入RNAsafe(RNA样品保存液，91115-100)中，可在37℃保存一天，在25℃保存一周，在4℃保存一个月，在-20℃或者–80℃长期保存。
2.样品应避免反复冻融，否则会影响RNA的提取得率和质量。
3.提取时，RNA在裂解液MRLPlus中时不会被RNase降解，但后续处理过程中应使用不含RNase的吸头和器皿。
4.样品在加入裂解液MRLPlus并匀浆后，可在–80℃保存一个月以上。
5.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
重要提示：
①第一次使用前,请先在漂洗液RW、70%乙醇、漂洗液WB瓶中加入指ding量无水乙醇，详见瓶上的标签。
②所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行，提取效果更佳！
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤
1.动物组织：
a．电动匀浆：取新鲜组织10~20mg加入500μl裂解液MRL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。
b．液氮研磨：液氮研磨组织成细粉，取10~20mg组织细粉加入500μl裂解液MRL Plus，剧烈涡旋振荡，直到无明显粉末团即可。
c．将裂解物13,000rpm离心3min，沉淀不能裂解的碎片。
d．下接操作步骤3。
2.细胞
a.悬浮细胞：离心收集细胞，加入500μl裂解液MRL Plus（<8x106细胞）,吹打混匀，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
b.贴壁细胞：不需要消化，吸弃培养基后，直接在培养皿/板中加裂解液MRLPlus（每<8x106细胞加500μl裂解液MRLPlus）进行消化、裂解；或者，先用胰mei消化后离心收集细胞，然后加入裂解液MRLPlus，吹打混匀，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
c.下接操作步骤3。
3.将裂解匀浆物（或离心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000rpm离心1min，基因组DNA被吸附在膜上，保留滤液（RNA/Protein在滤液中）。
把gDNA吸附柱放入2.0ml离心管，置于4℃度，以备提取DNA用。
以下是总RNA的提取步骤：
4.向滤液中加入等体积的70%乙醇，用移液器吹打混匀。
5.每次转移≤750μl滤液混合物至RNA吸附柱中，13,000rpm离心1min，此时，RNA被吸附在膜上，保留滤液，以备提取Protein。
滤液中含有Protein，请转入一个合适大小（至少2倍滤液体积）的离心管，用于步骤18开始的Protein提取。
6.加入700μl去蛋白液RW1，室温放置1min,13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
7.加入500μl漂洗液RW（检查是否已加入乙醇），13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
8.重复步骤7。
9.将RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm离心2min，除去膜上残留的乙醇。
10.取出RNA吸附柱，放入RNase-free1.5ml离心管中，向RNA吸附膜的中央部位悬空滴加30~50μl的RNase-freeH2O，室温放置1min，13,000rpm离心1min，管底即总RNA。
11.得到RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
以下是DNA的提取步骤：
12.向步骤3的gDNA吸附柱中，加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
13.加入700μl漂洗液WB（检查是否已加入乙醇），12,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
14.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
15.将DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm离心2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
16.取出gDNA吸附柱，放入新的1.5ml的离心管中，向吸附膜的中央悬空滴加100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中预热效果更好），室温放置3~5min，12,000rpm离心1min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min。
17.得到的DNA可以存放在2~8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。
以下是提取Protein的步骤：
18.向步骤5的滤液中加入等体积的缓冲液APP，涡旋振荡混匀，室温放置15min沉淀Protein。
19.13,000rpm离心5~10min，小心弃上清。加入0.5ml70%乙醇，颠倒混匀后，离心1min，小心弃上清，留下蛋白沉淀，尽量将残留液体用移液器吸干净。
20.室温晾干沉淀5~10min，注意一定让乙醇挥发干净，以免影响下游试验。
21.将蛋白沉淀溶解于30~150μl1x蛋白上样缓冲液（如需要蛋白定量，缓冲液中不应该加入溴酚兰）或其它下游试验要求的缓冲液中。
由于裂解液MRLPlus强变性作用或者不同蛋白等电点，蛋白可能溶解比较困难，用移液器吹打帮助溶解或者改变PH值帮助蛋白溶解，短暂离心取上清使用。或者用5%SDS或者8M尿素帮助溶解蛋白沉淀后做蛋白定量。如果需要BCA蛋白定量可能需要把8M尿素稀释到3M。
22.95℃放置5min溶解和变性蛋白，回复到室温，最高速离心1min，取上清进行SDS-PAGE电泳或者westernblot等试验。
与RNA相关的产品：
71118-100 Script III 1stStrand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Univ ersal SYBR Green qPCR Mix(适用于所有qPCR仪)
与miRNA相关的产品：
71418-25 Script III miRNA 1stStandSynthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assaykit（for qPCR，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25+71419-500）
动物组织细胞RNA/DNA共提试剂盒 核酸提取
