Blood miRNA Mini Kit

全血（液体样本）microRNA 快速提取试剂盒

全血（液体样本）microRNA快速提取试剂盒

目录号：91214

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）

产品简介

常见的离心柱型的 RNA Kit/总 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有专题文章阐述）。

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是浓缩型的 Trizol )，配合 miRNA 专用的溶液体系，专用于快速提取全血、血浆、血清、脑脊液、尿液等液体样本的 miRNA 和其它各种小 RNA(15-30 nt )。

Blood miRNA Mini Kit 可以提出来包含 miRNA 的总 RNA，用于miRNA 的 RT、qPCR 检测，以及全转录组测序等；根据需要，也可以一次性把 miRNA和总RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分别提出来。

产品特点

1. 本公司生产的Blood miRNA mini Kit质量优异，可以媲美进口品牌。

2. 本品可在常温下提取 RNA，不需要 4℃离心机；亦可以兼容 4℃离心机。

注意事项

1. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用几天后，可能会出现沉淀晶体，并不影响使用，取其上清直接使用就可以。

2. 血液 RNA 的常温保存/运输/提取的简易方案：

临床取样：在临床上，使用抗凝管采血后，取250μl新鲜血液，加入 750μl 的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#91012-100)，用移液枪反复抽打并振荡混匀，在室温裂解 5~10 min，直至血细胞充分发生裂解。

保存：经裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 个月，在-70℃保存半年。

运输：可冰袋4℃运输 1 天，干冰-20℃运输一周。

提取：后续RNA提取按 R213（或 R012）的说明书进行。

3.RNA 纯度及浓度检测:

血清/血浆的 RNA 含量特别低，已经低于分光光度计测量的下限，无法准确测量，因此无法通过测量 OD 值或者比值的方法来判断浓度或者纯度，只能通过下游做 RT-qPCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑电泳检测 RNA 完整性并不适用于血清/血浆 RNA。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

操作步骤

第一次使用前，先在Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙醇中加入无水乙醇，加入量详见瓶上的标签。

1. 每 250 μl 液体样品 (血清、血浆、脑脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反复抽打几次，然后剧烈震荡 15 sec，充分混匀。（液体样品和裂解液 RLS 的终体积比总是 1：3）

注意：对于含有高污染物样品（如全血样品），可以用灭菌水按照1：1的比例稀释一倍后开始提取。

2. 将匀浆样品在室温下放置 5 min，使得核酸蛋白复合物wan全分离。

3. 加入 200 μl 氯仿，剧烈振荡 15 秒，并在室温下放置 2 分钟。

4. 于 4℃（或室温）13，000 rpm 离心 10 分钟。 样品会分成三层：下层有机相、中间层、上层无色的水相，RNA 存在于水相中。水相层的容量大约为所加裂解液 RLS 体积的 70%。

5. 转移上清（约 500 μl）至一个新的离心管中，加入 1.5 倍体积（750 μl）的无水乙醇，吹打混匀。

6. 每次转移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，倒弃滤液。重复此过程，直到上清混合液全部上柱。

7. 向 RNA 吸附柱内加入 700 μl Wash Solution 1（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm 离心 1 min，倒弃滤液。

8. 向 RNA吸附柱内加入 500 μl Wash Solution 2/3（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm离心1 min，弃滤液。

9. 重复步骤 8 一次。

10. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2min，除去膜上残留的乙醇。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 RNase-Free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加 30~50 μl RNase-Free ddH2O，室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min，管底即包含 microRNA 的总 RNA。

附：microRNA 富集方法（仅仅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它总RNA 成份。一般不推荐）

注意：当非特异扩增较多或者扩增背景较高时，可以尝试使用富集方法提取的microRNA。

1. 按照前面标准操作步骤 1－4 操作，直到得到上清。

2. 取上清（约 500 μl）至一个新的离心管，加入等体积 70％乙醇（必须是室温的），吹打混匀，不要离心。

3.取700 μl上清混合液，加入一个RNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，收集滤液。并将滤液转移至一个新的离心管，然后把RNA 吸附柱放回空的收集管内，再加入剩下的混合物，离心，收集滤液。

此时，滤液含有microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的总RNA（mRNA、tRNA、rRNA 等大于 200nt 的 RNA），如果有需要，可以按照前面标准操作步骤7－11 操作，漂洗、洗脱，得到去除了 microRNA 的总 RNA。

4. 较精确估计滤液体积，加入 0.65 倍体积无水乙醇（必须是室温的），吹打混匀，不要离心。

5. 将≤750 μl滤液混合物加入microRNA吸附柱中，12,000 rpm离心1min，micoRNA 被吸附在膜上，倒弃废液。重复此过程，直到所有溶液都上柱。

6. 按照前面标准操作步骤 7－11 操作，经漂洗，洗脱后，得到富集的microRNA。

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