动物组织/细胞microRNA快速提取试剂盒
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯仿）是通用型 microRNA快速提取试剂盒（Cat91015）的升级版，专用于提取各种动物组织、细胞的miRNA（包含 miRNA 的总 RNA），提取过程不再需要使用氯仿，并采用du有的 gDNA 过滤器
动物组织/细胞microRNA快速提取试剂盒
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit
动物组织/细胞 microRNA 快速提取试剂盒（免氯仿）
动物组织/细胞microRNA快速提取试剂盒
目录号：91409
产品内容
产品成份 |
91409-50（50 次） |
裂解液MRL Plus |
25 ml |
Wash Solution 1 |
12 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
Wash Solution 2/3 |
10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free ddH2O |
5 ml |
gDNA 过滤器和收集管 |
50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 |
50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 |
50 支 |
RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 |
50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）
产品简介
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯仿）是通用型 microRNA快速提取试剂盒（Cat91015）的升级版，专用于提取各种动物组织、细胞的miRNA（包含 miRNA 的总 RNA），提取过程不再需要使用氯仿，并采用du有的 gDNA 过滤器，高效滤除基因组，得到包含 miRNA 的总 RNA，可直接用于 miRNA 和 mRNA 的 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、测序等。
但是，市场上常见的离心柱型的 RNA Kit/总 RNA Kit，不能有效吸附回收 miRNA；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有专题文章阐述）。
注意事项
1. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。
2. 样品加入裂解液 MRL Plus 匀浆后，样品可在–80℃保存一个月以上。
3. RNA 在裂解液 MRL Plus 中时不会被 RNase 降解，但后续处理过程中应使用不含 RNase 的吸头和器皿。
4. 取RNA样本时，把新鲜组织样本浸入 RNAsafe (RNA 样品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一个月，在-20℃或者–80℃长期保存。
重要提示：
①shou次使用前, 先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙醇
中加入指ding量无水乙醇，详见瓶上的标签。
② 所有离心步骤均需要在室温（15~37℃）下进行，提取效果更佳！
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤
1.动物组织：
a．电动匀浆：取新鲜组织10~20 mg 加入 500 μl 裂解液 MRL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。
b．液氮研磨：液氮研磨组织成细粉，取10~20 mg 组织细粉加入500μl 裂解液 MRL Plus，剧烈涡旋振荡，直到无明显粉末团即可。
c．将裂解物13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。下接操作步骤 3。
2.细胞
a.悬浮细胞：离心收集细胞，加500 μl 裂解液 MRL Plus（<8x106细胞）, 吹打混匀，剧烈涡旋振荡20秒，充分裂解。
b.贴壁细胞：不需要消化，吸弃培养基后，直接在培养皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106细胞加500μl 裂解液 MRL Plus）进行消化、裂解； 或者，先用胰mei消化后离心收集细胞，然后加入裂解液 MRL Plus，吹打混匀，剧烈涡旋振荡 20 秒，充分裂解。
c. 下接操作步骤 3。
3. 将裂解匀浆物（或离心得到的上清）全部加入gDNA过滤器中（过滤器放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，保留滤液（RNA 在滤液中）。
4. 向滤液中加入 1.25 倍体积的无水乙醇，用移液器吹打混匀。
5. 每次转移≤750 μl滤液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm离心1min，此时，RNA 被吸附在膜上，弃滤液。重复此过程，直到溶液全部上柱。
6. 加入 700 μl Wash Solution 1（检查是否已加入乙醇），室温放置 1 min, 13,000 rpm 离心30sec，弃滤液。
7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（检查是否已加入乙醇），13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
8. 重复步骤 7。
9. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的留乙醇。
10. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 RNase-free 1.5 ml 离心管中，向 RNA吸附膜的中央悬空滴加 30-50 μl RNase-free H2O， 室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min，管底即包含 miRNA 的总 RNA。
11. 得到 RNA/miRNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
相关产品：
71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）
附录：
microRNA 富集方法（仅仅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它总 RNA成份。一般不推荐）
注意：当非特异扩增较多或者扩增背景较高时，可以尝试使用富集方法提取的microRNA。
1. 按照前面步骤 1、2 操作，直到得到上清或者裂解物。
2. 向上清或者裂解物中加入 0.5 倍体积的无水乙醇（必须是室温的），吹打混匀。
3.将全部混合液加入一个gDNA 过滤器中， 13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液（microRNA 在滤液中）。
此时，RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的总 RNA（mRNA、tRNA、rRNA），如果有需要，可以按照前面标准操作步骤6－10 操作，经漂洗、洗脱后，得到去除了 microRNA 的总 RNA。
4. 较精确估计滤液体积，加入等体积的无水乙醇（必须是室温的），吹打混匀，不要离心。
5. 每次转移≤750 μl滤液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm离心1 min，micoRNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。重复此过程，直到所有滤液混合物都上柱。
6. 按照前面标准操作步骤 6－10，经漂洗，洗脱后，得到 microRNA。
动物组织/细胞microRNA快速提取试剂盒
