Fungus Total RNA Mini Kit

真菌总RNA 提取试剂盒（含 gDNA 过滤器）

真菌总RNA提取试剂盒 (带gDNA过滤器)

目录号：91515

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15~25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。

产品简介

适用于快速提取各种真菌的总RNA，gDNA过滤器能高效滤除gDNA，提取的RNA，可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普通转录组测序、芯片等。

产品特点

1.无毒：免lv仿、免β-巯基乙chun！

2.高效：提取全过程仅需20 min！

3.高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

操作步骤

提示：

所有离心步骤均需要在室温（15~37℃）下进行。

第一次使用前请先在漂洗液RW 中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。

1.材料处理：

a．转移 500 μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖酚去除剂 PAD 至 1.5 ml 离心管中，混匀备用。

注意：糖酚去除剂 PAD 是提取多糖、多酚、次级代谢产物多、色素含量丰富的困难样品bu可或缺的成分。对于简单样本，不加糖酚去除剂PAD，RNA 产量可能会提高一些。

b．液氮中研磨真菌组织成细粉，取≤50 mg 细粉转入上述装有 PRL 裂解液的离心管中, 剧烈涡旋震荡 30 sec，充分混匀。放离心管架上，接着研磨下一个样本。

（冬天气温低， 37℃摇床放置 3 min，可增强裂解效果，提高产量）

c． 将裂解物 13,000 rpm 离心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用1 ml裂解液PRL和100μl糖酚去除剂PAD去裂解 100 mg 样品，RNA 产量会翻倍。

2.小心吸取上清（一般480 μl，注意不要吸到沉淀）转入一个新的 1.5 ml离心管中，加入 0.5 倍体积（一般 240 μl）的无水乙醇, 吹打混匀。

3.每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管）， 13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，绝大部分的 gDNA 被滤除，RNA 和少量 gDNA 残留被吸附在膜上。重复此过程，直到溶液全部转入 gDNA 过滤器。

4.取出步骤3 的 gDNA 过滤器，放入一个新的 2.0ml 离心管中，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液（RNA 在滤液中），加入 250 μl 无水乙醇，吹打混匀。

5.将滤液混合物转入RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，此时，RNA被吸附在膜上，倒弃滤液。

6.加入700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

7.加入500 μl 漂洗液 RW（检查是否已加乙醇），13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

8.重复步骤7。

9.将RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。

10.取出RNA 吸附柱，放入 1.5 ml RNase-free 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

11.提取的总RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

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