FlashPure Blood Total RNA Mini Kit

血液总RNA 提取试剂盒（离心柱型）

全血RNA快速提取试剂盒 核酸提取

目录号：91016

产品内容

自备试剂

无水乙醇、β-巯基乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。

产品简介

适用于快速提取新鲜血液的总RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT qPCR，普通转录组测序、RACE等。

产品特点

1.高效：提取全过程仅需20 min！

2.高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

操作步骤

提示：所有离心步骤均需要在室温（15 ~37℃）下进行。

① 第一次使用前，请先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量无水乙醇。

② 操作前，用RNase-Free H2O将10X红细胞裂解液RLB稀释到 1X。

③ 操作前，在裂解液 RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1ml RLT中加入 10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。

1.在适合大小的RNase free 离心管中加入 1 体积（<1.5 ml）加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和 3 体积的红细胞裂解液 RLB，颠倒混匀，可轻弹管壁,确保混匀。

2.室温放置10 分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。

注意：如果 RNA 降解严重，可在冰上裂解，时间可以长一些以充分裂解。

3.12,000 rpm 离心 20 秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清

（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团。

注意：离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在 一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液，重悬后重复步骤 2，3。

注意：上清尽可能的吸弃，残留过多会稀释裂解液，造成裂解结合异常，产量纯度降低。

4.涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀wan全松散重悬，加入350 μl（< 0.5 ml全血）或者 600 μl（0.5~1.5ml 全血）裂解液 RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡 20 秒，充分裂解。

注意：病人正常血样白细胞数量为 4000-7000/μl，如果血样中白细胞数量可能大幅增加，应该适当减少处理量。或者按照 350 μ（l < 2x106 白细胞）或者 600 μl（2x106~1x107白细胞）的比例加裂解液 RLT。

5.用吸头吹打混匀帮助裂解，或者剧烈涡旋震荡，直到得到满意匀浆结果。(或者电动匀浆30秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。

6.向裂解物中加入等体积（一般350 μl / 600 μl）的 70%乙醇，吹打混匀。

7.每次转移≤700 μl 混合物至一个 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，RNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。重复此过程，直到溶液全部上柱。

8.加700μl去蛋白液RW1，室温放置1min，13,000rpm离心 30 sec，倒弃滤液。

9.加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。

10.重复步骤9。

11.将RNA吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上乙醇。

12.取出RNA 吸附柱，放入一个新的 RNase - free1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加 30-50 μl RNase free H2O（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

13.提取的RNA 可直接用于下游实验，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

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