NobleRyder DNA连接酶
NobleRyder DNA连接酶
NobleRyder CLO01-20KU DNA连接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 20KU
NobleRyder CLO01-80KU DNA连接酶 T4 DNA ligase（Rapid） 80KU
NobleRyderCLO01-20KUDNA连接酶T4 DNA ligase（Rapid）20KU
产品品牌：NobleRyder
产品货号：CLO01-20KU
产品名称：DNA连接酶
英文名称：T4 DNA ligase（Rapid）
产品规格：20KU
NobleRyder DNA连接酶
产品内容：
组分 |
CLO01-20KU |
CLO01-80KU |
T4 DNA Ligase (400U/μL) |
50 μL |
200 μL |
10 x T4 DNA Ligase Buffer |
100 μL |
0.5 mL |
5 x Rapid Ligase Buffer |
200 μL |
1 mL |
产品简介
T4 DNA Ligase是从表达T4 DNA连接酶基因的大肠杆菌中纯化而来，可催化双链DNA或RNA上的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化粘性末端或平末端之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。
活性定义
在20μL的连接反应体系中，6μg的λDNA-HindⅢ分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
注意事项
1.请于使用前确保产品wan全解冻，che底混匀后短暂离心，置于冰上备用。
2. T4 DNA Ligase不稳定，使用时冰上操作，用完立即放回-20℃。
3.反复冻融会影响产品的性能。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验方法
1.DNA片段与载体连接（粘性末端连接）
①冰上配制连接反应体系：
试剂 |
体积 |
线性化载体DNA |
20~100 ng |
插入片段DNA |
3:1~10:1（片段：载体摩尔比） |
10 x T4 DNA Ligase Buffer |
1 μL |
T4 DNA Ligase (400U/μL) |
1 μL |
DNase-Free Water |
Up to 10 μL |
②反应条件：
25℃反应10 min。
2.DNA片段与载体连接（平末端连接）
①冰上配制连接反应体系：
试剂 |
体积 |
线性化载体DNA |
20~100 ng |
插入片段DNA |
1:1~5:1（片段：载体摩尔比） |
5 x Rapid Ligase Buffer |
2 μL |
T4 DNA Ligase (400U/μL) |
2 μL |
DNase-Free Water |
Up to 10 μL |
*平末端载体与片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，防止其自身环化。
②反应条件：
25℃反应1 h或16℃过夜。
3. DNA文库构建中接头连接反应
①冰上配制连接反应体系：T4 DNA Ligase (400U/μL)
试剂 |
体积 |
dA-tailed DNA |
10 μL |
DNA Adapter |
1:10~1:20（dA-tailed DNA : DNA Adapter摩尔比） |
5 x Rapid Ligase Buffer |
4 μL |
T4 DNA Ligase(400U/μl) |
2 μL |
DNase-Free Water |
Up to 20 μL |
②反应条件：
25℃反应10 min。
如需失活T4 DNA Ligase在65℃反应10 min或者70℃反应5 min。
产品订购信息：
NobleRyderCLO01-20KUDNA连接酶T4 DNA ligase（Rapid）20KU
NobleRyderCLO01-80KUDNA连接酶T4 DNA ligase（Rapid）80KU
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