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日本同仁CK04 cck-8试剂盒

日本同仁CK04 cck-8试剂盒，产品简介：

产品品牌：同仁

产品名称：cck-8试剂盒

英文名称：Cell Counting Kit-8

产品货号：CK04

产品规格：500t

日本同仁CK04 cck-8试剂盒，产品说明：

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验
使用说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）

1

、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2

、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3

、接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）
二、细胞活性检测

1

、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。

2

、向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3

、将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

4

、用酶标仪测定在 450nm处的吸光度。

5

、如果暂时不测定 OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10μ L 0.1M的 HCl或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值 -毒性检测

1

、在 96孔板中配置 100μ L的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时（在 37℃， 5% CO2的条件下）。

2

、向培养板加入 10μ L不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间（例如： 6、 12、 24或 48小时）。

3

、向每孔加入 10μ L CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD值的读数）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。

4

、将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

5

、用酶标仪测定在 450 nm处的吸光度。

6

、如果暂时不测定 OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10μ L 0.1M的 HCl或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算： .
细胞活力（％） =[A(加药 )－ A(空白 )]／ [ A(0加药 )－ A(空白 )]× 100

A

（加药）：具有细胞、 CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A

（空白）：具有培养基和 CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A

（ 0加药）：具有细胞、 CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
注意事项：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK-8试剂后的培养时间。
②白细胞可能需要培养较长时间。
③当使用标准 96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为 1 ,000个 /孔 (100μ L培养基 )。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于 2,500个 /孔 ( 100μ L培养基 )。如果要使用 24孔板或 6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的 10%加入 CCK-8溶液。
④如果没有 450nm的滤光片，可以使用吸光度在 430-490 nm之间的滤光片，但是 450nm检测灵敏度最高。
⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

CCK-8

法与其它检测方法之间的比较：
细胞计数方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK-8法
形成的 formazan的水溶性 差 好 好 好
产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 无需预制 无需预制
检测灵敏度 高 很高 很高 高
检测时间 较长 较短 较短 最短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性 高，细胞形态wanquan消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
大批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷